Bosch PPS8 C2 Series Manuale Utente Pagina 88
- Pagina / 153
- Indice
- SEGNALIBRI
Valutato. / 5. Basato su recensioni clienti
2. ERGEBNISSE 87
2.4.1.12 Entfernung des HeliTags M13 durch Behandlung von EGFP X
a
-M13 HeliTag-
Protein mit Faktor X
a
Die Entfernung eines Tags nach der Reinigung ist mitunter unentbehrlich, insbesondere bei
pharmazeutischen Proteinen. Aus diesem Grund wurde eine Erkennungssequenz für den
Faktor X
a
zwischen EGFP und den HeliTag M13 (HeliTagX
a
M13-EGFP) kloniert (siehe
Kapitel 2.4.1.7). Da die N-terminale Sequenzierung des mit Faktor X
a
gespaltenen HeliTag-
X
a
M13-EGFP scheiterte, wurde die erfolgreiche Abspaltung des Proteins durch ein einfaches
Experiment bewiesen. HeliTagX
a
M13-EGFP wurde unter den üblichen Bedingungen durch
eine IMAC gereinigt (IMAC 1) und das in den Fraktionen mit HeliTagX
a
M13-EGFP ent-
haltene Imidazol wurde durch eine zweifache Dialyse gegen IMAC-Puffer entfernt und der
Ansatz geteilt. Eine dieser Fraktionen wurde mit Faktor X
a
behandelt und beide Fraktionen
über Ni-NTA-Säulen nochmals gereinigt (IMAC 2).
Tabelle 2.8: Nachweis der erfolgreichen Abspaltung des X
a
-M13 HeliTags von EGFP
Reinigungsschritt relative Fluoreszenz (%)
HeliTagX
a
M13-EGFP 159
HeliTagX
a
M13-EGFP nach IMAC 1 100
HeliTagX
a
M13-EGFP nach Dialyse 86
HeliTagX
a
M13-EGFP ohne Behandlung mit X
a
nach IMAC 2 18
HeliTagX
a
M13-EGFP nach Behandlung mit X
a
nach IMAC 2 2
Dabei lief das mit Faktor X
a
behandelte Protein beim Auftragungs- bzw. Waschschritt durch
die Säule, während das nicht behandelte Protein wie erwartet auf der Säule zurückgehalten
wurde und erst bei der Behandlung mit Imidazol eluiert werden konnte (siehe Tabelle 2.8). Da
zuvor gezeigt wurde, daß EGFP ohne fusionierten Tag nicht in der Lage ist spezifisch an die
Matrix zu binden, zeigt dieses Experiment die erfolgreiche Abspaltung des HeliTags vom
EGFP.
- Strukturbestimmung 1
- Stefan Minning 1
- PETER HØEG 2
- Danksagung 3
- INHALTSVERZEICHNIS 3 4
- INHALTSVERZEICHNIS 5 6
- INHALTSVERZEICHNIS 7 8
- INHALTSVERZEICHNIS 8 9
- ABBILDUNGSVERZEICHNIS 9 10
- ABBILDUNGSVERZEICHNIS 10 11
- TABELLENVERZEICHNIS 11 12
- BKÜRZUNGSVERZEICHNIS 12 13
- BKÜRZUNGSVERZEICHNIS 13 14
- 1 Einleitung 15
- INLEITUNG 15 16
- INLEITUNG 16 17
- INLEITUNG 17 18
- INLEITUNG 18 19
- INLEITUNG 19 20
- INLEITUNG 20 21
- INLEITUNG 21 22
- INLEITUNG 22 23
- INLEITUNG 23 24
- INLEITUNG 24 25
- INLEITUNG 25 26
- INLEITUNG 26 27
- 1. EINLEITUNG 27 28
- Glyceridestern 28
- INLEITUNG 28 29
- 1.2 Expressionssysteme 30
- INLEITUNG 30 31
- INLEITUNG 31 32
- INLEITUNG 32 33
- INLEITUNG 33 34
- 1.3 Proteinreinigung 35
- INLEITUNG 35 36
- INLEITUNG 36 37
- INLEITUNG 37 38
- INLEITUNG 38 39
- INLEITUNG 39 40
- 1.4 Aufgabenstellung 41
- 2 Ergebnisse 42
- RGEBNISSE 42 43
- RGEBNISSE 44 45
- RGEBNISSE 46 47
- RGEBNISSE 48 49
- RGEBNISSE 49 50
- RGEBNISSE 50 51
- RGEBNISSE 51 52
- RGEBNISSE 54 55
- Zeit (h) 56
- RGEBNISSE 56 57
- RGEBNISSE 57 58
- RGEBNISSE 58 59
- Aktivität (U ml 60
- MeOH (g l 60
- RGEBNISSE 60 61
- RGEBNISSE 61 62
- RGEBNISSE 62 63
- RGEBNISSE 63 64
- RGEBNISSE 64 65
- RGEBNISSE 65 66
- RGEBNISSE 66 67
- RGEBNISSE 67 68
- RGEBNISSE 68 69
- RGEBNISSE 69 70
- (P. pastoris)E F S D G G 71
- RGEBNISSE 71 72
- Temperatur (°C) 73
- RGEBNISSE 73 74
- RGEBNISSE 74 75
- RGEBNISSE 75 76
- Fluoreszenz 77
- Relative GFP Konzentration 77
- RGEBNISSE 77 78
- 2. ERGEBNISSE 78 79
- Ende des EGFP 79
- RGEBNISSE 79 80
- RGEBNISSE 80 81
- RGEBNISSE 81 82
- RGEBNISSE 82 83
- RGEBNISSE 83 84
- RGEBNISSE 84 85
- RGEBNISSE 85 86
- RGEBNISSE 86 87
- (HeliTagX 88
- HeliTag M13 89
- RGEBNISSE 89 90
- 3 Diskussion 91
- ISKUSSION 91 92
- ISKUSSION 92 93
- ISKUSSION 93 94
- ISKUSSION 94 95
- ISKUSSION 96 97
- Pichia pastoris 98
- ISKUSSION 98 99
- ISKUSSION 99 100
- ISKUSSION 100 101
- ISKUSSION 101 102
- ISKUSSION 102 103
- ISKUSSION 103 104
- ISKUSSION 104 105
- ISKUSSION 105 106
- 4 Zusammenfassung 107
- USAMMENFASSUNG 107 108
- 5 Material & Methoden 109
- 5.2 Chemikalien 110
- 5.3 Verwendete Plasmide 110
- Sequenz (5´ → 3´) 111
- Verwendung 111
- ATERIAL & METHODEN 111 112
- ATERIAL & METHODEN 112 113
- ATERIAL & METHODEN 113 114
- ATERIAL & METHODEN 114 115
- ATERIAL & METHODEN 115 116
- ATERIAL & METHODEN 116 117
- ATERIAL & METHODEN 117 118
- ATERIAL & METHODEN 118 119
- ATERIAL & METHODEN 119 120
- ATERIAL & METHODEN 120 121
- ATERIAL & METHODEN 121 122
- ATERIAL & METHODEN 122 123
- ATERIAL & METHODEN 123 124
- ATERIAL & METHODEN 124 125
- ATERIAL & METHODEN 125 126
- Pfu DNA 127
- Polymerase 127
- XL1-Blue 127
- ATERIAL & METHODEN 127 128
- 5.7 Arbeiten mit Proteinen 129
- ATERIAL & METHODEN 129 130
- ATERIAL & METHODEN 130 131
- 5.8 Proteinreinigung 132
- ATERIAL & METHODEN 132 133
- 5.10 Aktivitätstests 134
- ATERIAL & METHODEN 134 135
- 6 Literatur 136
- ITERATUR 136 137
- ITERATUR 137 138
- ITERATUR 138 139
- ITERATUR 139 140
- ITERATUR 140 141
- ITERATUR 141 142
- ITERATUR 142 143
- ITERATUR 143 144
- ITERATUR 144 145
- ITERATUR 145 146
- ITERATUR 146 147
- ITERATUR 147 148
- ITERATUR 148 149
- ITERATUR 149 150
- ITERATUR 150 151
- 6. LITERATUR 151 152
- Lebenslauf 153
Prodotti e manuali riguardandi Piani cottura Bosch PPS8 C2 Series
Piani cottura Bosch PKE 61.. Manuale Utente
(3 pagine)
(3 pagine)
Piani cottura Bosch PKF6 series Manuale Utente
(20 pagine)
(20 pagine)
Piani cottura Bosch PKD9..N24.. Manuale Utente
(48 pagine)
(48 pagine)
(460 pagine)
Piani cottura Bosch NCT612C01 Manuale Utente
(2 pagine)
(2 pagine)
(118 pagine)
© 2020, manymanuals.it. Tutti i diritti riservati | 0.051 s |
Manymanuals.com
Manymanuals.de
Manymanuals.fr
Manymanuals.it
Manymanuals.pl
Manymanuals.cz
Manymanuals.es
Manymanuals-pt.com
Commenti su questo manuale